·临床输血专栏·j§室匿堂垫!垒生箜!!鲞箜垒塑·综述·脐血库造血干细胞冻存方法的研究现状韩洪祯脐带血富含造血干细胞和各系祖细胞,被认为是除骨髓以外的一种很有应用前景的移植用的造血干细胞来源。与骨髓血相比,脐血来源丰富,容易采集,寻找无关供体时间短,HLA配型要求低,具有更强的扩增潜能、复制能力,传播巨细胞病毒危险性低,发生移植物抗宿主病(GVHD)危险性小和可扩充少数民族供体库等优点”‘2】。自1988年Gluckman等p1实施第l例脐带血干细胞移植以来,近20多年,脐血移植和脐血库的建设得到了飞速发展。截止2014年1月,全世界33个国家的48个脐血库中储存了超过600 000份公共脐血,并且逐年递增H。为了尽快为等候移植的患者提供HLA相符的造血干细胞,使脐血移植发挥更大的作用,脐血库的建设显得越发重要。而脐血库建立过程中,脐血样本处理的核心技术之一就是脐血细胞的冻存,这关系到造血干/祖细胞保存时间的长短、保存质量以及冻存复苏后的回收率和活性维持,更关系到临床移植的成败。本文就脐血冻存方法及其影响因素综述如下。一、脐带血冻存方式脐血库脐血冷冻保存的要求较为严格。首先,在保存脐带血的整个过程中不免会有细胞的损失,而移植需要一定量的细胞。

为了弥补这种损失,则需要一定的体外培养来扩增。更加优化的冻存方法可以减少冻存对细胞的损伤,降低体外培养难度。更为有效的冻存方法也能减少冻存保护剂的残留对需移植患者的有害影响。因此,优化脐带血的冷冻保存方法十分必要。其次,脐血冻存时间通常长于骨髓及外周血,至少要保证3—5年。此外,还要尽量地减少冻存体积。目前脐血保存常用的方法有程控降温冷冻保存和非程控降温冷冻保存两种15,。1.程控降温冷冻保存:程控降温冷冻保存也就是一般所谓的“慢速冷却法”。它是依照冷冻程序将储存盒放人程控速率冷冻箱中降温,待温度降至一80℃时,再将储存盒转移置于一196 oC液氮中保存。它是目前最为常用的脐血保存方法。虽然具体实施作者单位:100730首都医科大学附属北京同仁医院输血科通信作者:韩洪祯,Email:hanhongzhen@sina.cornDOI:10.159321j.0253-9713.2016.6.035步骤及保护剂使用等方面有所不同,但基本原理都是程控降温和液氮保存。基础科研和临床应用已证明程控降温冷冻保存是保存脐血造血干细胞的有效方法。文献报道,将在液氮中保存了15年以上的脐血干细胞解冻后,进行粒细胞集落(CFU—G)培养,发现单核细胞的回收率为80%,而且其增殖潜能未受明显影响旧。

但是程控降温冷冻保存对设备要求较高,设备昂贵、操作繁琐、细胞保存的费用较高,故难以普及。为了更好地规范和标准化脐血低温保存技术,近年来出现了一种新的程控降温冷冻保存方法——BioArchive System(生物档案系统)p1。BioArchiveSystem是Thermo Genesis公司开发的专门用于脐带血造血干细胞冻存的设备,集程控降温和冷冻保存于一体。与常规程控降温冷冻相比,生物档案系统具有占用空间少、易于操作、管理方便、存储安全等特点。生物档案系统中存储脐带血所用的条码是全球唯一的。当有重复条码出现时,系统拒绝继续工作,并显示相关提示信息,这样可以确保每份冷冻样品标识的唯一性。生物档案系统通过机械臂和可控冷却器(CRF)的协同来冷却和存储样品。将脐血样本存入CRF,插入冷冻插口,进行一系列条码号确认后程控降温系统启动冷冻程序。样品按冷冻程序降温到一50℃时,机械臂将冷冻脐带血从CRF中取出,放人存储器内的指定位置,将样本在液氮中存储。整个存取过程均在密闭的状态下进行,每次操作所对应的脐带血是唯一的,而且冷冻脐带血在存储容器中的移动都是在液氮中进行的。此系统可自动将所冷冻保存的脐带血的条码号、冷冻曲线、冷冻时间、存储位置等基本资料记录下来,并定期自动备份到磁盘上。待冷冻结束后,进行打印归档。这样每份样品的冷冻保存的基本资料就有电子、磁盘备份和文字3套系统,可以保证资料的安全性和可靠性。当需取出样品时,只需输人样品的条码号,系统就可根据存储的相关信息,自动完成操作。液氮控制模块每天定时定量自动地补充液氮,保证冷冻样品安全保存于液氮中。生物档案系统专用的冷冻袋万方数据